僅供科研使用,不得用于臨床檢驗。
小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)定性檢測試劑盒(ELISA)
說明書
【產品名稱】
通用名稱:小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)定性檢測試劑盒(ELISA)
英文名稱:Mouse anti-hepatitis B virus surface antibody(HBsAb) ELISA KIT
【包裝規格】
96人份/盒
【預期用途】
僅供科研使用,定性檢測血清、血漿中小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)。
【檢驗原理】
試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人乙肝表面抗原(HBsAg)的包被微孔中,依次加入標本、陰性和陽性對照、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),判定陰陽性。
【主要組成成分】
主要成分
組分 | 數量 | 主要成分 |
陰性對照 | 1.0 ml×1 |
|
陽性對照 | 1.0 ml×1 |
|
包被微孔板 | 96T | 預包被固相抗原 |
HRP標記抗體 | 6mL | HRP標記的檢測抗體 |
樣本稀釋液 | 6mL |
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底物液A | 6mL | 過氧化脲工作液 |
底物液B | 6mL | TMB工作液 |
20×濃縮洗滌液 | 30mL | 含0.15%Tween20的PBS |
說明書 | 1份 | -- |
自封袋 | 1個 | -- |
不干膠 | 2片 | -- |
需要但未提供的材料及耗材
1、酶標儀
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動洗板機
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml量筒
7、無粉一次性乳膠手套
【儲存條件及有效期】
1、2-8℃保存,切勿冷凍,有效期6個月。
2、開封使用后,包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,密閉自封袋,并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
3、開封后,按照建議的條件保存,校準品、包被微孔板和HRP標記抗體,有效期為14天,其他成分在標簽標明的有效期內是穩定的。
【適用儀器】
半自動的酶標儀,如Thermo MK3,或者國產酶標儀。
【樣本要求】
樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1、細胞培養上清:4000rpm條件下離心20min,去除細胞顆粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反復凍融。
2、血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,4000rpm條件下離心20min,小心地分離出血清,保存在- 20℃以下,避免反復凍融。
3、血漿:肝素,EDTA,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下,離心20分鐘取上清,血漿保存在-20℃以下,避免反復凍融。
樣本保存和穩定性
樣本在2-8℃條件下,可以儲存72h,或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后,不是一次檢測完,請按一次用量分裝凍存,避免反復凍融,使用時在室溫下解凍,確保樣品均勻充分解凍。
【檢驗方法】
試劑準備
1、使用前,所有的組分都要至少復溫30min,確保充分復溫到室溫。
2、濃縮洗滌液:從冰箱取出的濃縮洗滌液,會有結晶產生,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶*溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水,按1:20稀釋,即1份的濃縮洗滌液,添加19份的蒸餾水。
操作程序
【檢驗結果的解釋】
1. 陰性對照OD值:小于0.2。
2. 陽性對照OD值:大于0.8。
3. 陽性判斷(Cut-Off值):陰性對照OD值+0.25,樣本OD值大于閾值,判定為陽性,反之,為陰性。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測小鼠血清、血漿中小鼠抗人乙肝表面抗體,根據A值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。
【保存條件】
2℃-8℃保存,有效期6個月。
【注意事項】
生物安全
1、檢測必須符合實驗室管理規范的規定,嚴格防止交叉污染,所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。
2、試劑盒的液體組分中,含有proclin-300防腐劑,可能引起皮膚過敏反應,避免吸入煙霧與皮膚接觸。
3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入煙霧。戴上防護手套,實驗完成后*洗手。
技術提示
1、混合蛋白溶液時,避免起泡。
2、加校準品與樣本時,每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭,公共組分應該懸臂加樣,避免交叉污染。
3、合適的溫育時間,和充分的洗滌步驟,是保證實驗結果準確性的必要條件。
4、底物溶液為無色液體,保存過程中變為藍色,代表底物溶液已經失效,不得使用。
5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致,加入終止液后,藍色底物產物,會瞬間變為黃色。
6、實驗中,用剩的板條,應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
7、所有液體組分,使用前充分搖勻,嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。
廢物處理
所有使用或未使用的試劑,所有污染性的一次性材料,應當遵循傳染性或潛在傳染性產品的處理程序,每個實驗室都有責任根據其實驗的類型和危險性級別,進行廢物和污物的處理,同時要嚴格依照有關規定對待所有的廢物和污物。