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小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)定性檢測試劑盒說明書

更新時間:2017-09-12      瀏覽次數:1855

僅供科研使用,不得用于臨床檢驗。

 

小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)定性檢測試劑盒(ELISA)

說明書

 

【產品名稱】

通用名稱:小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)定性檢測試劑盒(ELISA)

英文名稱:Mouse anti-hepatitis B virus surface antibodyHBsAb) ELISA KIT

 

【包裝規格】

96人份/盒

 

【預期用途】

僅供科研使用,定性檢測血清、血漿中小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)。

 

 

【檢驗原理】

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人乙肝表面抗原(HBsAg)的包被微孔中,依次加入標本、陰性和陽性對照、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),判定陰陽性。

 

【主要組成成分】

主要成分

組分

數量

主要成分

陰性對照

1.0 ml×1

 

陽性對照

1.0 ml×1

 

包被微孔板

96T

預包被固相抗原

HRP標記抗體

6mL

HRP標記的檢測抗體

樣本稀釋液

6mL

 

底物液A

6mL

過氧化脲工作液

底物液B

6mL

TMB工作液

20×濃縮洗滌液

30mL

含0.15%Tween20的PBS

說明書

1份

--

自封袋

1個

--

不干膠

2片

--

 

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶標儀

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、洗瓶或者自動洗板機

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

7、無粉一次性乳膠手套

 

【儲存條件及有效期】

  1、2-8保存,切勿冷凍,有效期6個月。

  2、開封使用后,包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,密閉自封袋,并將全部試劑放回2-8冰箱。

  3、開封后,按照建議的條件保存,校準品、包被微孔板和HRP標記抗體,有效期為14天,其他成分在標簽標明的有效期內是穩定的。

 

【適用儀器】

  半自動的酶標儀,如Thermo MK3,或者國產酶標儀。

 

【樣本要求】

  樣本類型和采集

以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。

1、細胞培養上清:4000rpm條件下離心20min,去除細胞顆粒和聚合物,上清液保存在- 20以下避免反復凍融。

2、血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,4000rpm條件下離心20min,小心地分離出血清,保存在- 20以下避免反復凍融。

3、血漿肝素,EDTA,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下,離心20分鐘取上清,血漿保存在-20以下,避免反復凍融。

 

樣本保存和穩定性

樣本在2-8條件下,可以儲存72h,或者在- 20儲存6個月。樣本收集后,不是一次檢測完,請按一次用量分裝凍存,避免反復凍融,使用時在室溫下解凍,確保樣品均勻充分解凍。

 

【檢驗方法】

試劑準備

1、使用前,所有的組分都要至少復溫30min,確保充分復溫到室溫。

2、濃縮洗滌液:從冰箱取出的濃縮洗滌液,會有結晶產生,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶*溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水,按1:20稀釋,即1份的濃縮洗滌液,添加19份的蒸餾水

 

操作程序

  1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4
  2.   設置陰性對照、陽性對照孔和樣本孔,陰性、陽新對照孔各加50μL對照品
  3.   樣本孔待測樣本50μL;空白孔不加。
  4.   除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
  6.   每孔加入底物A、B各50μL,37避光孵育15min。
  7.   每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

【檢驗結果的解釋】

1. 陰性對照OD值:小于0.2。

2. 陽性對照OD值:大于0.8。

3. 陽性判斷(Cut-Off值):陰性對照OD值+0.25,樣本OD值大于閾值,判定為陽性,反之,為陰性。

【試驗方法的局限性】

該試驗僅作為定性檢測小鼠血清、血漿中小鼠抗人乙肝表面抗體,根據A值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。

【保存條件】

    2-8保存,有效期6個月。

【注意事項】

生物安全

1、檢測必須符合實驗室管理規范的規定,嚴格防止交叉污染,所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。

2、試劑盒的液體組分中,含有proclin-300防腐劑,可能引起皮膚過敏反應,避免吸入煙霧與皮膚接觸。

3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入煙霧。戴上防護手套,實驗完成后*洗手。

 

技術提示

1、混合蛋白溶液時,避免起泡。

2、加校準品與樣本時,每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭,公共組分應該懸臂加樣,避免交叉污染。

3、合適的溫育時間,和充分的洗滌步驟,是保證實驗結果準確性的必要條件。

4、底物溶液為無色液體,保存過程中變為藍色,代表底物溶液已經失效,不得使用。

5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致,加入終止液后,藍色底物產物,會瞬間變為黃色。

6、實驗中,用剩的板條,應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

7、所有液體組分,使用前充分搖勻,嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。

 

廢物處理

  所有使用或未使用的試劑,所有污染性的一次性材料,應當遵循傳染性或潛在傳染性產品的處理程序,每個實驗室都有責任根據其實驗的類型和危險性級別,進行廢物和污物的處理,同時要嚴格依照有關規定對待所有的廢物和污物。

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