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小鼠ATP酶免檢測,三磷酸腺苷ELISA含量檢測方法

更新時間:2019-07-08      瀏覽次數:1376

ATP酶免檢測,三磷酸腺苷ELISA含量檢測方法

試劑盒性能:

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上。

2.批內變異系數與批間變異系數應分別小于10%和15% 。

檢測范圍:                                              

200 nmol/L - 6400 nmol/L

 

靈敏度:                                              

低檢測濃度小于10 nmol/L

操作步驟

  1. 標準品的加樣:設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
  2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻
  3. 加酶:每孔加入酶標試劑100μl,空白孔除外
  4. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘
  5. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
  6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  7. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  8. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)
  9. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本小鼠三磷酸腺苷(ATP)水平。用純化的小鼠三磷酸腺苷(ATP)捕獲抗體包被微孔板,制成固相體,往包被的微孔中依次加入小鼠三磷酸腺苷(ATP),再與HRP標記的檢測抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠三磷酸腺苷(ATP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品小鼠三磷酸腺苷(ATP)含量

 

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