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人基質(zhì)金屬蛋白酶10ELISA試劑盒操作步驟

更新時間:2020-12-04      瀏覽次數(shù):905

 

 

樣本處理及要求

1.  血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.  血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.  組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

4.  細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注:標本溶血會影響后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

  試劑盒組成及試劑配制 
1. 酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。 
2. 標準品(Standard):6瓶。
3. 生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
4. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
5. 生物素標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
6. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 
7. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 
8. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)

 人基質(zhì)金屬蛋白酶10ELISA試劑盒操作步驟

樣本收集保存

  1、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

  2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

  3、細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

  4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

  5、保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

     

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