上海ELISA試劑盒滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型成為有色的氧化型，ELISA檢查試劑盒出現色彩反響。因而，可通過底物的色彩反響來斷定有無相應的免疫反響，色彩反響的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。
上海ELISA試劑盒測定方法中有三個必要的試劑：
（1）固相的抗原或抗體，即"免疫吸劑"（immunosorbent）；
（2）酶符號的抗原或抗體，稱為“酶聯物"、“聯絡物"（conjugate）；
（3）酶反響的底物。依據試劑的來歷和標本的狀況以及檢查的具體條件，可規劃出各種不同類型的檢查方法。
ELISA法是免疫診斷中的一項新技術，現已成功地應用于多種病原微生物所致使的盛行癥、ELISA檢查試劑盒寄生蟲病及非盛行癥等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，依據現已運用的作用，認為ELISA試劑盒法具有活絡、特異、簡略、敏捷、安穩及易于自動化操作等特色。
有的試劑盒中所設陰性對照為不含蛋白質或蛋白質含量較底的緩沖液，致使反響后發作的本底或許較正常人血清的本底低得多。
上海ELISA試劑盒在實驗條件（包括試劑）較難保證安穩的狀況下，這種差異法較為合適。
ELISA試驗時，注意事項如下：
1.正式試驗時，應別離以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證試驗結果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反響，可采用羊血清、兔血清或BSA等關閉。
2.在ELISA中，進行各項試驗條件的挑選是很重要的，其間包含：
（1）固相載體的挑選：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方法可所以凹孔平板、試管、珠粒等。現在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體，在運用前均可進行挑選：用等量抗原包被，在同一試驗條件下進行反響，查詢其顯色反響是否均一性，據此判明其吸附性能是否出色。
（2）包被抗體（或抗原）的挑選：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有必定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進行包被后，在其它試驗條件相一同，查詢陽性標本的OD值。挑選OD值大而蛋白量少的濃度。關于大都蛋白質來說一般為1～10μg／ml。
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更新時間：2019-09-18 
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